TÇCD 2011 29. National Pediatric Surgery Congress and 27. National Congress of The Egyptian Pediatric Surgical Association

Aim: To evaluate the oxidative stres parameters in the rat appendicites model related to the degree of the inflammation

Material and Methods: Forty-two rats, that had previously created appendicitis by simple ligation of the appendix while preserving the mesenteric vessels, were randomly located in seven groups. In Group 1 appendectomy was carried out simultaneously. In rest of the groups  re-laparotomy was performed on the 6th, 12th, 24th, 48th, 72nd and 96th post-operative hours respectively and appendectomy was performed. Excised appendices were cleared with serum physiologic and divided into two equal pieces for tissue biochemical analzes and histopathological evaluations. The samples kept for tissue biochemical analyzes were preserved in a deep fridge at -70 degrees Celsius while the samples for histopathological examination were kept in 10 % formalin. Following homogenization the tissues were centrifuged (Jouan G412) at +4 degrees Celsius and tissue preotein carbonyl (PCO), total thiol (T-SH),  protein thiol (P-SH) and advanced  oxidation  protein  products  (AOPP)  levels  were  measured  by  a  UV–visible spectrophotometer   (Heraeus   400,   Kendro Laboratory Product, Osterode, Germany). Total protein assay was performed by Bradford method. Inflammation was evaluated with modified Biert-Verhofstad classification. Necrosis, polimorphonuclear leukocyte count, macrophage count, peritonitisi, perforation, hemorhage and edema were evaluated and total scores were determined. The values were presented as mean ± Standard deviation and the statistical analyzes were performed with One-Way ANOVA and Tukey tests. P was significant at <0.05.

Results:The AOPP levels were similar between the groups (p>0.05), evaluation of but P-SH (p<0.05), PCO (p<0.05), T-SH (p<0.05), P-SH (p<005) and total protein levels (p<0,05) revealed significant differences. Tissue T-SH, P-SH and PCO values were found to increase while total protein and AOPP levels were decreasing with respect to the duration of the inflammation. Total histological scores in Group 1 (0.51±0.33), Group 2 (7.83±2.22), Group 3 (9.16±2.92), Group 4 (8.16±1.47), Group 5 (11.33±1.86), Grup 6 (8.66±2.16) and Group 7 (10,83±1,47)(p<0,05) were significantly different (p<0.05)

Discussion:The role of oxidative stres is well documented in the inflamattory processes. Tissue PCO content is a valuable index in protein oxidation. Similarly, tissue T-SH, P-SH and AOPP levels demonstrate the oxidative stress. The progressive decrease found in the total protein levels was due to the progressive damage of the tissues. The relative decrease in AOPP levels was probably due to the decrease in the protein content of the tissues. On the other hand, increased T-SH and P-SH values indicate the increase in thiol-containing enzymes in the mitochondria as a protective measure against the tissue damage. Of course, measurement of tissue oxidative stress parameters is of no value in the clinical practice, but we may speculate that the evaluation of plasma oxidative stress parameters may be beneficial in the medical follow-up of the appendicitis patients.

Amaç: Bu çalışmada, deneysel sıçan apendisit modelinde doku inflamasyon derecesinin oksidatif stres üzerindeki etkisinin araştırılması planlanmıştır.

Denekler ve Yöntem: Apendiks mezo damarları dışarıda bırakılarak 2/0 polglactin dikişle bağlanan 42 sıçan altışar denek içeren 7 gruba rasgele olarak ayrıldı (Grup 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7). Birinci grupta bağlanmış olan appendiks hemen eksize edildi. Diğer gruplarda sırasıyla, 6., 12., 24., 48., 72 ve 96. saatlerde deneklere re-laparotomi yapıldı. Inflame appendiks eksize edildi ve serum fizyolojik ile temizlenerek doku biyokimyası tetkikleri ve histopatolojik inceleme için iki eşit parçaya bölündü. Doku biyokimyası tetkikleri için ayrılan parçalar -70 santigrad derecede,  histopatolojik inceleme için ayrılan parçalar ise % 10 formalin içinde saklandı. Doku biyokimyası analizi için homojenizasyonun ardından dokular +4 santigrat derecede santrifüje (Jouan G412) edildi ve ultraviyole spektrofotometre (Heraeus 400, Kendro Laboratory Product, Osterode, Germany) ile toplam thiol (T-SH), protein thiol (P-SH), ileri oksidasyon protein ürünleri (advanced oxidation protein products)(AOPP) ve protein karbonil (PCO) düzeyleri çalışıldı. Dokulardaki toplam protein miktarı Bradford yöntemi ile belirlendi. Histopatolojik incelemede inflamasyon sınıflaması modifiye Biert-Verhofstad skalası ile yapıldı. Nekroz, polimorfonükleer lökosit sayısı, makrofaj sayısı, peritonit, perforasyon, hemoraji ve ödem değerlendirildi ve toplam inflamasyon puanları kaydedildi. Sonuçlar, ortalama ± standart sapma olarak belirtildi ve veriler One-Way ANOVA ve Tukey yöntemleri ile değerlendirildi. P<0,05 istatistiki olarak anlamlı kabul edildi.

Sonuçlar: GruplarınAOPP değerleri birbirine benzerdi (p>0,05). P-SH (p<0,05), PCO (p<0,05), T-SH (p<0,05), P-SH (p<0,05) ve toplam doku protein değerleri (p<0,05) gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı farklı idi. T-SH, P-SH ve PCO değerleri appendiks ligasyonunun süresine bağlı olarak artmakta, AOPP ve toplam protein değerleri ise azalmakta idi. Dokuların toplam inflamasyon puanları Grup 1 (0,51±0,33), Grup 2 (7,83±2,22), Grup 3 (9,16±2,92), Grup 4 (8,16±1,47), Grup 5 (11,33±1,86), Grup 6 (8,66±2,16) ve Grup 7 (10,83±1,47)(p<0,05) olarak bulundu.

Tartışma: Inflamatuar süreçlerde oksidatif stresin rolü iyi bilinmektedir. Doku PCO düzeyi, protein oksidasyonunun en kullanışlı belirtecidir. Ayrıca, T-SH, P-SH, AOPP da oksidatif stres belirleyicileridir. Çalışmamızda, günler içinde iflamasyonun ilerlemesi ile anlamlı olarak düşen toplam protein değerleri dokuların bu süre içinde ileri derecede harap olduğunu göstermektedir. AOPP’ deki göreceli düşüş ise protein miktarındaki azalmaya bağlanabilir çünkü sabit doku protein düzeylerinde oluşan doku hasarında AOPP’ nin artması beklenmektedir. Artmış T-SH ve P-SH değerleri ise doku hasarına karşın mitokondri hasarını engelleyici thiol içeren enzimlerin aktivitesinin arttığını göstermektedir. Klinik ortamda, dokularda elde edilen oksidatif stres belirteçleri ile akut apendisit tanısı konulmasının pratik bir yararı bulunmamaktadır, ancak çalışmamızdan çıkan sonuçlar ışığında bu hastaların takiplerinde kan oksidasyon parametrelerinin izleminin yararlı olabileceğini düşünmekteyiz.